“Vispārīgā bioloģija”, “Dzīvības ķīmija, šūna”
2. laboratorijas darbs. 

Aprēķinu piemēri.

2. tabula. Paraugu masas izmaiņas pēc žāvēšanas un noteiktais ūdens/ sausnas saturs paraugos.

Produktu sausnas un ūdens satura aprēķini.

Aprēķinu piemērs dots atbilstoši kāda nezināma parauga “XXX” (Nr. P) sausnas un ūdens satura aprēķinu gaitai.

 1. Noskaidrojam cik daudz sausnas no produkta palika pēc žāvēšanas, tātad "sausnas masu":

                         [sausnas masa] = [glāze + sausais paraugs] – [sverglāzes masa]

                                     20,15 - 20,0 = 0,15 (g)

 2. Aprēķinam sausnas saturu (%) svaigajā paraugā:

[sausnas % svaigā paraugā] = (0,15/0,50) · 100 = 30 (%)

3. Aprēķinam ūdens saturu (%) svaigajā paraugā:

Tā kā visa svaigā parauga masa tiek pieņemta par 100%, tad

            [ūdens % svaigā paraugā] = 100 - [sausnas % svaigā paraugā], jeb

            [ūdens % svaigā paraugā] = 100 - 30 = 70 (%)

3. tabula. Dati optiskā blīvuma un proteīnu masu saistošā grafika konstruēšanai.

Koncentrācijas / masas aprēķini.

Lai veidotu grafiku, kas parāda nomērītā optiskā blīvuma saikni ar proteīnu daudzumu, mums jāzin, cik daudz proteīnu tika ievadīts Bradfordas reakcijā.

Bradfordas reakcijai visos gadījumos tika ņemti 20 ml testējamā šķīduma. Tātad jāaprēķina cik mg proteīnu atrodas 20 ml šķīduma, ja tā koncentrācija ir, piemēram, 0,7 mg/ml.

            Dotā koncentrācija norāda, ka katrā šī šķīduma mililitrā atrodas 0,7 mg BSA (proteīnu).

Ērtības labad varam:

                                     1 ml izteikt µl.              1 ml = 1 000 µl,

                   savukārt 0,7 mg izteikt µg              0,7 * 1 000 = 700 µg.

Tālāk varam sastādīt proporciju:

       1000 µl šķīduma ar koncentrāciju 0,7 mg/ml atrodas    700 µg proteīnu.

           20 µl šķīduma ar koncentrāciju 0,7 mg/ml atrodas     X  µg proteīnu.

Risinot proporcijas, nezināmo X atrod pilnās diagonāles vērtības (700 µg un 20 µl) sareizinot un reizinājumu izdalot ar nepilnās (tās, kurā ir nezināmais) diagonāles zināmo vērtību (1000 µl):

                               X = (700 · 20) / 1000 = 14 (µg)

 5. tabula. Aprēķini piemērā izmantotās izejas vērtības un rezultāti.

Proteīnu daudzuma aprēķini paraugos.

Aprēķināmie lielumi 4 . tabulā izcelti ar uzbiezinātu tekstu.

1. Aprēķinam proteīnu koncentrāciju mērītajā paraugā (mg/ml).

Izmantojot 4. tabulas stabiņa “proteīni 20 µl šķīduma (µg)” skaitlisko vērtību "4,0", kura nolasīta no grafika, varam sastādīt proporciju:

           20 µl   proteīnu šķīduma atrodas       4 µg   proteīnu.

       1000 µl   proteīnu šķīduma atrodas      X  µg proteīnu.

Risinot proporcijas, nezināmo X atrod pilnās diagonāles vērtības (1000 µl un 4 µg) sareizinot un reizinājumu izdalot ar nepilnās (tās, kurā ir nezināmais) diagonāles zināmo vērtību (20 µl):

                        X = (1000 · 4) / 20 = 200 (µg)

Tātad 1 ml (1000 µl) šķīduma atrodas 200 µg proteīnu.

Šo koncentrāciju pārveidojot prasītajās mērvienībās iegūstam    200 µg/ml = 0,2 mg/ml

2. Aprēķinam proteīnu koncentrāciju (mg/ml) šķīdumā pirms atšķaidīšanas.

Tie produktu šķīdumi (lizāti), kuros bija sagaidāma liela proteīnu koncentrācija, pirms Jūs tos saņēmāt mērīšanai, tika atšķaidīti. Atšķaidījuma reižu skaits dots 4. tabulas stabiņā “ atšķaidījums reizes (x)".

Ja sākotnējais lizāts mērīšanai ticis atšķaidīts 5 reizes, tad iegūto koncentrāciju pareizina ar atšķaidījuma reižu skaitu:

[proteīnu koncentrācija pirms atšķaidīšanas] = [koncentrāciju mērītajā paraugā] · [atšķaidījums reizes]

[proteīnu koncentrācija pirms atšķaidīšanas] = 0,2 · 5 = 1,0 (mg/ml).

3. Aprēķinam proteīnu daudzumu 100 g svaiga produkta (g/100g).

Zinot, ka produktu lizāti iegūti produkta iesvaram pievienojot 1N NaOH šķīdumu tā, lai kopējais tilpums būtu 1 ml, un to, ka parauga iesvars lizātā bija vienīgais proteīnu avots, varam secināt, ka lizāta vienā mililitrā noteiktais proteīnu daudzums atradies svaigā parauga iesvarā, kura masa dota 4. tabulā.

Tātad, dotajā piemērā 1 mg proteīnu atrodas 0,25 g svaigā produkta (4. tabula, stabiņš “iesvara masa proteīnu ekstraktam (g)”).

Varam sastādīt proporciju:

                            0,25 g   svaigā produkta satur   1,0  mg proteīnu

                        100,00 g   svaigā produkta satur    X   mg proteīnu

                                    X = (100,00·1) / 0,25 = 400 (mg)

Tā kā proteīnu masa tiek prasīta gramos, veicam pārveidojumu:

                                     400 mg = 0,4 g

4. Aprēķinam proteīnu daudzumu % no produkta sausnas masas.

Iepriekš tika noteikts, ka produkts P satur 30% sausnas (1. tabula).

Izmantojot šo rezultātu varam izteikt, cik gramus sausnas satur 100 g svaigā produkta:

Tātad, 100 grami attiecīgā produkta satur 30 gramus sausnas.

4. tabulas stabiņā “proteīnu daudzumu 100 g svaiga produkta (g/100g)” jau ierakstījām, ka 100 g svaiga produkta satur 0,4 gramus proteīnu.

No šiem abiem lielumiem varam izrēķināt, cik % no šī produkta sausnas masas veido proteīni.

 [Proteīni % no sausnas masas] = (0,4/30) · 100 = 1,3 %