03. Proteīnu
daudzuma spektrofotometriska noteikšana. Aprēķinu piemēri.
1.
tabula. Paraugu masas izmaiņas pēc žāvēšanas un noteiktais ūdens/
sausnas saturs paraugos.
Produktu sausnas un
ūdens satura aprēķini. Aprēķinu piemērs dots atbilstoši
kāda nezināma parauga “XXX” (Nr. P) sausnas un ūdens satura aprēķinu
gaitai.
[sausnas masa] [sausnas % svaigā paraugā] =
· 100, jeb
[iesvara masa] [sausnas % svaigā paraugā] =
(0,15/0,50) · 100 = 30 (%) 3.
Aprēķinam ūdens saturu (%) svaigajā paraugā: Tā
kā visa svaigā parauga masa tiek pieņemta par 100%, tad
[ūdens % svaigā paraugā] = 100 - [sausnas % svaigā
paraugā], jeb
[ūdens % svaigā paraugā] = 100 - 30 = 70 (%)
2.
tabula. Dati optiskā blīvuma un proteīnu masu saistošā grafika
konstruēšanai.
Koncentrācijas /
masas aprēķini. Lai veidotu grafiku, kas parāda
nomērītā optiskā blīvuma saikni ar proteīnu daudzumu, mums jāzin, cik
daudz proteīnu tika ievadīts Bradfordas reakcijā. Bradfordas reakcijai visos
gadījumos tika ņemti 20 ml testējamā šķīduma. Tātad
jāaprēķina cik mg proteīnu atrodas 20 ml šķīduma, ja tā koncentrācija ir,
piemēram, 0,7 mg/ml.
Dotā koncentrācija norāda, ka katrā šī šķīduma mililitrā
atrodas 0,7 mg BSA (proteīnu). Ērtības
labad varam:
1 ml izteikt µl.
1 ml = 1 000 µl,
savukārt 0,7 mg izteikt µg
0,7 * 1 000 = 700 µg. Tālāk varam sastādīt proporciju:
1000 µl šķīduma ar
koncentrāciju 0,7 mg/ml atrodas 700 µg proteīnu.
20 µl šķīduma ar koncentrāciju 0,7
mg/ml atrodas X
µg proteīnu. Risinot proporcijas, nezināmo X
atrod pilnās diagonāles vērtības (700 µg un 20 µl) sareizinot un reizinājumu
izdalot ar nepilnās (tās, kurā ir nezināmais) diagonāles zināmo vērtību
(1000 µl):
X = (700 · 20) / 1000 = 14 (µg)
Proteīnu
daudzuma aprēķini paraugos. Aprēķināmie
lielumi 4 . tabulā izcelti ar uzbiezinātu tekstu. 1.
Aprēķinam proteīnu koncentrāciju mērītajā paraugā (mg/ml). Izmantojot 4. tabulas stabiņa “proteīni 20 µl
šķīduma (µg)” skaitlisko vērtību "4,0", kura nolasīta no
grafika, varam sastādīt proporciju:
20 µl proteīnu šķīduma
atrodas 4 µg proteīnu.
1000 µl
proteīnu šķīduma atrodas X
µg proteīnu. Risinot proporcijas, nezināmo X atrod pilnās diagonāles
vērtības (1000 µl un 4 µg) sareizinot un reizinājumu
izdalot ar nepilnās (tās, kurā ir nezināmais) diagonāles zināmo vērtību
(20 µl):
X = (1000 · 4) / 20 = 200 (µg) Tātad
1 ml (1000 µl) šķīduma atrodas 200 µg proteīnu. Šo
koncentrāciju pārveidojot prasītajās mērvienībās iegūstam 200 µg/ml = 0,2 mg/ml
2. Aprēķinam proteīnu
koncentrāciju (mg/ml)
šķīdumā pirms atšķaidīšanas. Tie produktu šķīdumi (lizāti),
kuros bija sagaidāma liela proteīnu koncentrācija, pirms Jūs tos saņēmāt mērīšanai, tika atšķaidīti.
Atšķaidījuma reižu skaits dots 4. tabulas stabiņā “ atšķaidījums reizes
(x)". Ja sākotnējais lizāts mērīšanai
ticis atšķaidīts 5 reizes, tad iegūto koncentrāciju pareizina ar atšķaidījuma reižu skaitu: [proteīnu
koncentrācija pirms
atšķaidīšanas] = [koncentrāciju
mērītajā
paraugā] · [atšķaidījums reizes] [proteīnu
koncentrācija pirms
atšķaidīšanas] = 0,2 · 5 = 1,0 (mg/ml). 3. Aprēķinam proteīnu daudzumu 100 g svaiga produkta
(g/100g). Zinot, ka produktu lizāti iegūti produkta iesvaram
pievienojot 1N NaOH šķīdumu tā, lai kopējais tilpums būtu 1 ml, un to,
ka parauga iesvars lizātā bija vienīgais proteīnu avots, varam secināt,
ka lizāta vienā mililitrā noteiktais proteīnu daudzums atradies svaigā
parauga iesvarā, kura masa dota 4. tabulā. Tātad, dotajā piemērā 1 mg proteīnu atrodas 0,25 g svaigā
produkta (4. tabula, stabiņš “iesvara masa
proteīnu ekstraktam (g)”). Varam
sastādīt proporciju:
0,25
g svaigā produkta satur 1,0 mg proteīnu
100,00 g svaigā produkta satur
X mg proteīnu
X = (100,00·1) / 0,25 = 400 (mg) Tā
kā proteīnu masa tiek prasīta gramos, veicam pārveidojumu:
4. Aprēķinam proteīnu daudzumu % no produkta sausnas
masas. Iepriekš tika noteikts, ka produkts
P satur 30% sausnas (1. tabula). Izmantojot
šo rezultātu varam izteikt, cik gramus sausnas satur 100 g svaigā
produkta:
[100 grami]
30 % no 100 gramiem =
· [30 %] = 30 grami
100 Tātad,
100 grami attiecīgā produkta satur 30 gramus sausnas. 4.
tabulas stabiņā “proteīnu
daudzumu 100 g svaiga produkta (g/100g)” jau ierakstījām, ka 100 g
svaiga produkta satur 0,4 gramus proteīnu. No
šiem abiem lielumiem varam izrēķināt, cik % no šī produkta sausnas
masas veido proteīni.
[proteīni 100 gramos produkta] [Proteīni % no sausnas masas] =
· [100 ]
[sausna 100 gramos produkta] [Proteīni % no sausnas masas] = (0,4/30) · 100 = 1,3 %
|